* Ivan Voïnitski (oncle Vania), devenu rêveur et paresseux, jalouse le professeur qui est un hypocondriaque vaniteux. La pièce se déroule dans la propriété de Sonia, fille du professeur et nièce de Vania. Ce dernier a exploité toute sa vie le domaine pour en envoyer les revenus à Sérébriakov dont il admirait la science. Environ un an avant le début de la pièce, il perd toutes ces illusions sur les qualités humaines et intellectuelles de son beau-frère, ce qui le rend particulièrement amer, car il a l'impression d'avoir gâché sa vie.
* Elena est la seconde femme du professeur. Elle est très belle, et s'ennuie profondément au domaine. Elle n'est plus amoureuse de son mari et se sent séduite par le docteur Astrov.
* Le professeur Sérébriakov est égoïste et se plaint tout le temps. Il écrit « pour ouvrir des portes ouvertes ». Il pense avoir du succès auprès des femmes. C'est un intellectuel vieillissant qui se sent comme exilé dans cette propriété campagnarde. Il ne supporte pas de se voir vieillir. Il vit de manière complètement décalée : il écrit la nuit, dort le jour...
* Sonia est la fille du professeur et de sa première femme. Elle exploite le domaine avec son oncle Voïnistki qu'elle appelle « Oncle Vania ». Elle est amoureuse du docteur Astrov depuis longtemps, mais lui ne l'aime pas. Elle n'est pas belle et se fane encore plus dans la solitude.
* Astrov est médecin de campagne et vient souvent en visite au domaine. Il n'aime plus s'occuper de ses patients et n'aime plus personne. Il est seulement attiré par la nature. On comprendra vite qu'il est tombé sous le charme d'Elena.
* Marina est la nourrice de Sonia
* Téléguine est un propriétaire ruiné qui vit au domaine, aux crochets de Sonia et d'Oncle Vania.
* Maria est la grand-mère de Sonia, la mère de Vania et la belle-mère de Sérébriakov qu'elle admire. C'est une intellectuelle de province, typique des années 1860.

Une dispute éclatera entre Sérébriakov qui veut gager le domaine sans se soucier de l'avenir de sa fille et Voïnitski qui fait mine de tuer son beau-frère. Finalement Sérébriakov et Elena quittent la propriété à tout jamais, laissant les protagonistes à leurs frustrations et à leur destin.

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